01. 正相硅膠柱一般保存在什么溶劑里面比較合適？

短期和長(zhǎng)期都建議保存在正相測(cè)定所用的流動(dòng)相中，一般是正己烷和極少量的異丙醇 (95/5, 99/1, 99.5/0.5均可)。
 

02. 磷酸緩沖鹽損耗色譜柱，為什么？使用磷酸鹽緩沖液與其它緩沖液相比，會(huì)使色譜柱壽命縮短多少？

首先需要糾正大家一個(gè)誤區(qū)，對(duì)色譜柱來(lái)說(shuō)，pH＞6.5并不是大家理解的“中性環(huán)境”。當(dāng)緩沖鹽pH＞6.5時(shí)，對(duì)硅膠色譜柱來(lái)說(shuō)是偏堿性的環(huán)境，故對(duì)硅膠基質(zhì)是有損的。加上磷酸鹽分子小，易進(jìn)到鍵合相內(nèi)部造成鍵合相水解。因此經(jīng)常用磷酸鹽，在其它條件差不多一樣的情況下，色譜柱壽命肯定比不用磷酸緩沖鹽相對(duì)短一些。但用磷酸鹽也有其不可取代的優(yōu)點(diǎn)，如性質(zhì)穩(wěn)定，緩沖能力強(qiáng)等。
 

03. 反相離子對(duì)色譜法中，離子對(duì)是如何起作用的？

首先離子對(duì)試劑的解離端和目標(biāo)離子形成離子締合物，降低其極性，這樣就能較好的在色譜柱上保留。再者，根據(jù)疏水效應(yīng)理論，離子對(duì)試劑的疏水端是很容易和C18鏈相互作用的，這樣更容易在柱子上保留。所以離子對(duì)試劑作用是混合保留機(jī)制，即離子對(duì)保留機(jī)制，和樣品與離子對(duì)生成緊密的結(jié)合物，離子對(duì)試劑掩蔽化合物中的極性基團(tuán)，形成的變相反相保留機(jī)制，兩種作用共同作用。
 

04. 四丁基銨類(lèi)離子對(duì)試劑與烷基磺酸鈉離子對(duì)試劑有何不同？為何四丁基銨類(lèi)離子對(duì)試劑對(duì)色譜柱壽命影響如此大？

四丁基銨類(lèi)離子對(duì)試劑確實(shí)不如烷基磺酸鈉等離子對(duì)試劑用得普遍，原因是酸類(lèi)極性物質(zhì)很容易通過(guò)降低pH值的方法提高在反相色譜中的保留能力，降低pH可抑制酸的電離，使酸處于中性狀態(tài)而與疏水碳鏈的作用力增強(qiáng)。而堿類(lèi)分析物則受硅膠基質(zhì)pH上限的嚴(yán)重影響，流動(dòng)相pH很難調(diào)到很高，故分析堿性化合物的時(shí)候，常采用低pH下加入陽(yáng)離子對(duì)試劑。
實(shí)驗(yàn)表明，四丁基銨類(lèi)離子對(duì)試劑比烷基磺酸鈉等陽(yáng)離子對(duì)試劑更難從填料表面去除，故而色譜柱壽命折損比較嚴(yán)重。
 

05. 同一根色譜柱，做完項(xiàng)目A后再做項(xiàng)目B，為何保留時(shí)間會(huì)變化？為何峰形會(huì)異常？會(huì)發(fā)生怎樣的變化？

色譜柱被強(qiáng)保留物質(zhì)污染，即常說(shuō)的填料變性后，保留時(shí)間提前和滯后的情況都有，具體要看污染物的性質(zhì)，還要看分析物、固定相和污染物三者共同作用的情況，情況比較復(fù)雜，更是很難預(yù)測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。平時(shí)維護(hù)的時(shí)候，注意在測(cè)定后將污染物用可以將其溶解的溶劑反沖清洗，就可以減輕或避免這種情況的出現(xiàn)。

06. HPLC進(jìn)行柱前衍生目的是什么？

色譜技術(shù)中的化學(xué)衍生法系指在色譜過(guò)程中用特殊的化學(xué)試劑（一般稱(chēng)為衍生化試劑或標(biāo)記試劑），使樣品成分轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的衍生物之后進(jìn)行分離檢測(cè)的方法。目的為：1.將紫外-可見(jiàn)強(qiáng)吸收功能基團(tuán)引入被檢測(cè)對(duì)象，或加入熒光基團(tuán)將其轉(zhuǎn)變?yōu)闊晒庋苌铮蕴岣邫z測(cè)靈敏度；2.提高對(duì)分析樣品的分離和選擇性。

07. 多個(gè)樣品不好分離的時(shí)候，該怎么通過(guò)選擇合適的柱子來(lái)提高分離度？

提高分離度可從三個(gè)主要影響因素來(lái)考慮，柱效、選擇性和保留因子。可通過(guò)減小填料粒徑和增加柱長(zhǎng)提高柱效；選擇性和固定相選擇以及pH條件有關(guān)，通過(guò)選擇合適的色譜柱和合適的pH，可以提高選擇性；保留因子主要與流動(dòng)相組成和比例有關(guān)，其次流動(dòng)相pH和離子強(qiáng)度影響目標(biāo)物存在狀態(tài)，也會(huì)影響保留因子。有時(shí)候適當(dāng)延長(zhǎng)出峰時(shí)間增加保留因子，也可提高分離度。
 

08. 苯基柱，氰基柱該什么時(shí)候考慮用？

苯基柱用于含苯環(huán)的芳香族化合物的測(cè)定時(shí)，具有較高的選擇性。CN柱可作為一個(gè)保留能力最弱的反相柱使用，也可作為一個(gè)活性降低的正相柱使用。
 

09. 同樣類(lèi)型柱子還有長(zhǎng)度，粒徑等差異，這些該怎么去選擇？

長(zhǎng)度和粒徑都是用來(lái)改變柱效的，選擇原則是夠用就好。當(dāng)待分離物質(zhì)≤5個(gè)時(shí)，150mm柱長(zhǎng)的色譜柱可以滿(mǎn)足大多數(shù)樣品的分離。
 

10. 好奇寶寶提問(wèn)：普通的C18柱能作為正相色譜柱使用嗎？正相色譜體系中Z常用也最普通的是哪種色譜柱？正相柱在使用過(guò)程中與反相柱相比有什么需要注意的地方？

正相色譜分離模式是指固定相的極性比流動(dòng)相的極性大，反過(guò)來(lái)，流動(dòng)相極性大就是反相。C18固定相屬于疏水性相對(duì)比較強(qiáng)的，疏水性強(qiáng)就是極性很弱，應(yīng)該找不出極性比它更弱的流動(dòng)相了。況且色譜柱在使用時(shí)，要注意極性固定相盡量避免極性溶劑，非極性固定相盡量避免非極性溶劑，否則可能發(fā)生類(lèi)似“相似相溶”的作用。

正相體系常見(jiàn)的柱子有：硅膠柱、氨基柱、CN基柱和Diol二醇基柱，最普通的應(yīng)該就是硅膠柱。正相柱和反相柱比，最需要注意的是水分，正相柱對(duì)水分非常敏感，流動(dòng)相中水分含量的些微變化對(duì)保留時(shí)間影響很大，因此正相柱測(cè)定前平衡時(shí)間需要幾個(gè)小時(shí)甚至更長(zhǎng)。